做western
做western blot实验，怎么煮蛋白？
blot实验，怎么煮蛋白？
根据样品形式的差异进行选择。
如果是研究纯化的蛋白，可以用100℃，煮5min就行；
如果是研究细胞样品的膜蛋白，可以用膜蛋白抽提试剂盒先做目的蛋白的富集，而后同上处理
western blot等生物学试验中的内参是什么意思？
就是所有的细胞中几乎都表达的一种蛋白，就叫做内参，我理解的 设内参的目的就是为了看一下你的目的蛋白和这个内参的表达量的区别
westernblot原始数据提供什么？
Sapphire是多荧光检测系统，可多达4个激光光源，同时进行4通道荧光检测，获得更快的工作流程和更可靠的定量数据。
Sapphire配合AzureRed总蛋白荧光染色剂可以做总蛋白归一化和定量三个靶标蛋白，生成可以信赖的定量Western Blotting数据。
tbst缓冲液是什么？
1、TBST中含有 Tris-Hcl， NaCl，tween20 这三种物质，是做WESTERN BLOT中常用的一种缓冲溶液。
2、TBST是TBS Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
3、用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力。
4、PBST中由PBS 加入了Tween 20, Tween 20 是非离子型 去污剂。因为western 中所用的膜可以与蛋白质结合，这样的话孵育过程中，抗体是能够与膜非特异性结合的，为了防止以后曝光造成胶片背景太高，在孵育抗体后，混有Tween 2的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉，增加特异性。
5、在抗体的保存中，抗体往往是以极高浓度保存在甘油之中的，使用的时候按照一定的比例去稀释，TBST 跟TBS 都可以用来稀释抗体，以做孵育抗体之用。
wb转膜后封闭的原理？
western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用
在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。
所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用。